福建农林大学公选课课程教学大纲基本格式
分子克隆技术
（Molecular cloning technology）

(学时:64)

一、简要说明（或前言）

本课程是面向我校生物技术、生物信息、生物科学及生物类其他相关专业本科二年级的公共选修课。本课程共64学时，4学分。

二、课程的性质、地位和任务

分子克隆技术即纯化和扩增特定DNA片段的方法。该技术可将含有目的基因的DNA用体外重组方法将其插入克隆载体，形成重组克隆载体，通过转化与转导的方式，引入适合的寄主体内得到复制与扩增，然后再从筛选的寄主细胞内分离提纯所需的克隆体以达到纯化扩增之目的，分子克隆技术可用于获得多拷贝的目的基因或含有该目的基因的个体。

本课程通过授课，阅读，以及实验室实际操作而使学生掌握分子克隆技术，其中包括：

1. 掌握生化、分子生物学及分子克隆的基本原理。

2. 感性认识分子克隆的技术方法。

3. 了解分子克隆技术的热点问题和发展趋势

三、教学基本要求和方法

通过理论及专题相结合、教师与学生互动等授课形式，将系统介绍分子克隆技术及其应用。

四、授课教材及主要参考书目

分子克隆（第三版）J．萨姆布鲁克著科学出版社2002

五、学分和学时分配

学分分配

课程综合成绩=25%理论课评分+75%实验课评分

课时分配（本课程共64时，4学分）

授课教师讲授理论总课时的1/4，即16学时；学生实验操作总课时的3/4，即48学时

六、教学内容及学时分配

教学重点：分子克隆相关的酶学基础；常用载体；克隆策略；体外重组与筛选鉴定；基因操作有

关的基本技术（凝胶电泳技术、PCR技术、分子杂交技术、探针标记技术等）。

教学难点：分子克隆的基本过程、策略；基因操作有关的基本技术

学时分配：

基础生物化学知识8学时

分子克隆中使用的酶10学时

克隆载体6学时

DNA体外重组、导入和筛选鉴定8学时

核酸提取,纯化,与测定8学时

凝胶电泳6学时

分子杂交6学时

聚合酶链式反应技术 (PCR)6学时

转基因植物6学时

教学内容安排

第一章基础生物化学知识：

1）原子，分子与分子量，化学键

2）计量与浓度计算，缓冲液与pH

3）盐与大分子（DNA， RNA， protein）

4）Central Dogma（复制，转录与翻译）

第二章分子克隆中使用的酶 (Enzymes)：

    1）限制性核酸内切酶

2）DNA连接酶

3）DNA聚合酶

4）修饰酶

5）BP\LR 酶、infusion酶

第三章克隆载体 (Vectors)

1）质粒生物学特性

2）质粒载体

3）?噬菌体载体

4）M13单链丝状噬菌体载体

5）人工染色体载体

第四章. DNA体外重组、导入和筛选鉴定(Transformation)

1）DNA体外重组

2）导入受体细胞

3）重组子筛选鉴定

第五章核酸提取,纯化,与测定 (DNA analysis)

1）DNA提取的基本原理与方法

2）RNA提取的基本原理与方法

3）DNA和RNA浓度和纯度的测定

第六章凝胶电泳 (Electrophoresis)

1）琼脂糖凝胶电泳

2）聚丙烯酰胺凝胶电泳

3）脉冲电场凝胶电泳

4）凝胶电泳中核酸、蛋白的检测

第七章分子杂交 (Hybridization)

1）探针的标记

2）Southern杂交

3）Northern杂交

4）菌落杂交或噬菌斑杂交

5）斑点印迹杂交和狭线印迹杂交

6）Western杂交

第八章聚合酶链式反应技术 (PCR)
   1）PCR的基本特征
   2）PCR引物的设计
   3）PCR反应中使用的DNA聚合酶
   4） RT-PCR
   5） PCR技术的应用

第九章转基因植物

1）为什么要创造转基因植物？
   2）针对植物细胞的Ti质粒载体
   3）怎样产生转基因植物
   4）转基因植物技术的应用

  附件

分子克隆指南（上）(ed2000.com).pdf
分子克隆指南（下）(ed2000.com).pdf